今天pink来给大家分享一些关于革兰氏染色革兰氏染色的步骤和原理方面的知识吧，希望大家会喜欢哦
1、原理：革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G-）两大类，是细菌学上最常用的鉴别染色法。该染色法之所以能将细菌分为G+菌和G-菌，是因为一般认为革兰氏染色是基于细菌细胞壁特殊化学组分进行染色的。
2、步骤：
3、(一)涂片固定
4、在干净的载玻片中央滴加一滴蒸馏水，掘团用接种环进行无菌操作，挑取培养物少许，置载玻片的水滴中，与水混合做成菌悬液并涂布成直径约1cm的薄层。
5、(二)染色
6、在固定过的涂片菌膜上滴加草酸铵结晶紫染液，染色液应完全覆盖整个菌膜，染色1min。
7、(三)水洗
8、染色到一定的时间，拿住玻片使之成450角，用细小的水流把多余的染料冲洗掉，被菌体吸附的染料则保留。
9、(四)媒染
10、加碘液覆盖涂面染1min。在媒染处理时，媒染剂与染料形成不溶性的化合物，可增加染料和细菌的亲和力。
(五)水洗，用吸水纸吸去水分
用细小的水流缓慢冲洗涂片上的染色液，用吸水纸吸干。
(六)脱色
加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，20s~30s后再进行水洗，吸去水分。
(七)复染
蕃红染色液染色10s后，自来水冲洗。
(八)干燥，镜裂散扰检
染色的结果，革兰氏正反应菌体都呈紫色，负反应菌体都呈红色。
扩展资料
标本干燥后即进行固定，固定的目的有三个：
(1)杀死微生物，固定细胞结构。
(2)保证菌体能更牢固的粘附在载玻片上，防止标本水洗时被水冲洗掉。
(3)改变染料对细胞的通透性，因为死的原生质比活的原生质易于染色。
参考资料来源：百度百科-革兰氏染色法
参考资料来肆旦源：百度百科-革兰氏染色
革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法，1884年由丹麦医师、细菌学家汉斯·克里斯蒂安·约阿希姆·革兰氏（HansChristianJoachimGram，1853-1938）创立。革核帆兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤。
注意事项:
1.选用活跃生长期菌种染色,老龄的革兰氏阳性细菌会被染成红色而造成假阴性。
2.涂片不宜过厚,以免脱色不完全造成假阳性。
3.脱色是革兰氏染色是否成功的关键,脱色不够造成假阳性,脱色过度造成假阴性。
方法原理：
用于生物染色的染料主要有碱性染料、酸性染料和中性染料三大类。碱性染料的离子带正电荷，能和带负电荷的物质结合。因细菌蛋白改腔雹质等电点较低，当它生长于中性、碱性或弱酸性的溶液中时常带负电荷，所以通常采用碱性染料（如美蓝、圆唯结晶紫、碱性复红或孔雀绿等）使其着色。
酸性染料的离子带负电荷，能与带正电荷的物质结合。当细菌分解糖类产酸使培养基pH下降时，细菌所带正电荷增加，因此易被伊红、酸性复红或刚果红等酸性染料着色。中性染料是前两者的结合物又称复合染料，如伊红美蓝、伊红天青等。
革兰氏染色（GramStaining）是用于辨别病菌的一种方式：这类染色法运用细菌细胞壁上的微生物物理性质不一样，可将病菌分为两大类，即革兰氏阳性（GramPositive）与革兰氏阳性菌呈阴性（GramNegative）。这一上色方式由荷兰医师汉斯·布拉德·革兰于1884年所创造发明，最开始是用于辨别肺炎链球菌与克雷白氏肺炎菌中间的关联，后营销推广为辨别细菌种类的关键特点之一，对由病菌感染造成的病症的疾病诊断及医治拥有普遍主要用途。革兰氏染色结果是如何的呢？
一、基本原理
根据结晶紫初染和碘液媒染后，在植物细胞内产生了不溶解水的结晶紫与碘的一氧化氮合酶，革兰氏阳性菌因为其植物细禅颂胞偏厚、肽聚糖网层级较多且化学交联高密度，故遇酒精或甲苯褪色解决时，因缺水反倒使网眼变小，再再加它没有脂质，故酒精解决不容易出现间隙，因而可以把结晶紫与碘一氧化氮合酶紧紧留到壁内，使其仍呈蓝紫色；而革兰氏阳性菌阴性菌因其植物细胞薄、外膜层脂质成分高、肽聚糖层薄且化学交联度差，在遇脱色剂后，以脂质主导的外膜快速融解，薄而疏松的肽聚糖网不可以阻拦结晶紫与碘一氧化氮合酶的总混，因而根据酒精褪色后仍呈没有颜色，再经过沙黄等鲜红色染剂复染，就使革兰氏阳性菌阴性菌呈鲜红色[1]。
上色的差别主要是阴性与阳性细菌细胞壁的差别所造成的。
血压革兰氏阳性病菌的植物细胞
G细菌细胞壁具备偏厚（20-80nm）而高密度的肽聚糖层，高达50层，占细胞壁成分的40%～95%，它同细胞质的表层紧密相连（图2-9）。有的G细菌细胞壁中带有磷壁酸（teichoic-acid），也称胞壁质（murein），它是凡士林和核糖醇的高聚物，磷壁酸一般以糖或碳水化合物的酯而存有。因为磷壁酸带负电，它在体细胞表面调整正离子浓度值。磷壁酸与细胞生长相关，细胞生长中有自溶素（autolysins）酶类起功效，磷壁酸对自溶有着调整作用，阻拦胞壁过多溶解和壁溶。
假如植物细胞的肽聚糖层贺前郑被消溶，G体细胞变成原生质体（protoplasts），植物细胞荡然无存，而只留存细胞质。除链球菌感染外，大部分G细菌细胞壁中含非常少蛋白。
血液革兰氏阳性菌呈阴性病菌的植物细胞G—细菌细胞壁比G细菌细胞壁薄（15～20nm）而构造较繁杂，格外膜（outermembrane）和肽聚糖层（2～3nm）（图2-10）。在植物细胞和细胞质膜中间有一个显著的室内空间，称之为壁膜空隙（periplasmicspace）。
外膜G—细菌细胞壁外膜的基本成份是脂多糖（lipopolysaccharide,LPS），它同细胞质膜相似之处也是两层脂质，但除不饱和脂肪酸外还带有含糖量和蛋白。
LPS的含糖量一部分包悔桥含关键含糖量和O-特异含糖量。O-特异含糖量由反复支系的碳水化合物化合物分子结构构成，带有已糖（葡萄糖、半乳糖和鼠李糖）和二脱氨已糖。因为糖的种类不一样，使各种各样G—体细胞具备不一样特点的LPS。关键含糖量（corepolysaccharide）的关键成分是酮脱氨心酸（ketodeoxyoctonate,KDO）。
外膜中还带有几类蛋白质，如蛋白、透亮蛋白质。一些蛋白质具备埋孔功效（porin），管控外部分子结构进到体细胞；有的蛋白质分子结构能够做为噬菌体的蛋白激酶；很多G—病菌对高微生物有高致病是由LPS的成份决策的，它的毒副作用成分常称之为毒素累积（endotoxins）。
革袭瞎兰氏染色一般包括初染、媒染、脱色、复染等方法是：
1）涂片固定。
2）草酸铵1分拍纤空钟。
3）蒸馏水冲洗。
4）加碘液覆盖涂面染约1分钟。
5）水洗，用吸水纸吸去水分。
6）加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，20秒后水洗，吸去水分。
7）蕃红染色液（稀）染1分钟后，蒸竖竖馏水冲洗。干燥，镜检。
扩展资料
革兰氏染色原理是通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物。
革兰氏阳性菌遇乙醇或丙酮脱色处理时，不会出现缝隙，因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色；而革兰氏阴性菌在遇脱色剂后，呈无色，再经沙黄等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色。
其中，染色的差异主要是阴性与阳性细菌细胞壁的差异所引起的。
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